三價鐵離子等三價金屬離子，在硅膠基質的色譜柱中極易死吸附，從而損壞色譜柱，在液相直接檢測中存在較大難度。

本方法研究三價鐵離子與EDTA形成紫外可見的強吸收絡合物，再通過Comixsil HAX色譜柱保留。通過對絡合物的定量從而定量三價鐵離子等三價金屬離子。  

                         應用一：三價鐵離子的檢測

方法A、三價鐵離子流動相中與EDTA絡合

方法B、三價鐵離子在樣品配置過程中加EDTA進行絡合，從而流動相中不再添加EDTA  

       （本案例來源于某客戶提供的保健品中亞鐵離子的檢測方案）

說明：在以上“方法A”中，絡合三價鐵離子的過程是在鐵離子接觸到流動相時瞬時進行的，從而絡合物在HAX色譜柱上保留，并通過UV可視從而檢測。在“方法B”中，案例的實際樣品是硫酸亞鐵，但是亞鐵的二價離子，在固體鹽溶解時，水中電離出的游離亞鐵離子，即氧化成三價鐵離子，實際檢測到的也是三價鐵離子的EDTA絡合物，而這個與“方法A”不同的地方在于，客戶不喜歡流動相中加EDTA，所以是在樣品配置過程中，加入了EDTA，使樣品在進樣前已經絡合完畢。“方法A"中是梯度條件，”方法B“中是等度條件。單純的檢測，都可以用等度的方法進行，更方便。

兩種方法都可以用于單獨檢測三價鐵離子或者二價鐵離子。在此，需認識到，二價鐵離子無法與三價鐵離子分離的，因為二價鐵離子實際就是氧化后的三價鐵離子。所以，關于能否分離二價與三價鐵離子的問題討論，在這個方法中，是不存在的。

                       應用二：三價鉍離子的檢測

在前文三價鐵離子的基礎上。我們開發(fā)出三價金屬離子HPLC-UV檢測辦法。實際應用中，遇到了三價鉍離子的殘留檢測的問題。按照同樣的思路，以下案例以EDTA與三價鉍離子絡合物狀態(tài)，一樣得以相似方法檢測。

方法C、三價鉍離子與流動相中的EDTA絡合

      （此案例來源于某客戶提供的藥物制劑中三價鉍離子的檢測方案）

總結：

綜上，方法A,B,C的關于三價鐵離子（二價鐵離子）與三價鉍離子，在藥物制劑，保健品，藥物殘留中的應用。我們可以了解到，采用流動相中加EDTA,或者樣品配置時加EDTA(可避免流動相中加EDTA)，使三價金屬離子與EDTA絡合合，基于Comixsil HAX智能混合柱對此絡合物的保留，UV的可視化，可以用簡單的HPLC+UV的方法來檢測定三價離子（以上方法C中，客戶實際上也自行開發(fā)了樣品配置時加EDTA的方法）。同時，方法的實際優(yōu)化過程中，EDTA的濃度與甲酸銨的濃度，會影響金屬離子絡合物的保留，峰形以及UV響應值。這些因素是需要根據不同實際樣品而進行調整的。

小知識點：用過EDTA系統的清洗

在HPLC方法中，EDTA是能不使用則不使用的，然后它的特殊性，在一些傳統的老品種，老藥典方法中仍然存在。有很多關于用過EDTA的儀器，管路，如何清洗的問題。在此分享如下：

1.要使用EDTA時，管路盡可能用PEEK管；

2.懷疑或擔心EDTA殘留，要清洗儀器與金屬管路時，可以用100%的50mM CuSO4水溶液先沖洗管路1小時，再用0.2%-0.3%的硫酸水溶液清洗30分鐘，最后再用水清洗10分鐘左右即可。  

文中所采用的色譜柱規(guī)格為客戶實際正好在使用的規(guī)格，而當我們想開展相關實驗時，菲羅門推薦的首選用柱規(guī)格如下：

1.貨號：FMD-HAX3-YONU，描述：Comixsil HAX 3u 100*3.0mm

2.貨號：FMD-HAX3-EONU, 描述：Comixsil HAX 3u 100*4.6mm