動物源食品中氯霉素檢測的固相萃取方法
（PolyClean X-HLB）

一、實驗目的

本法為以Polyclean X-HLB (60mg/3mL)柱開發(fā)的針對動物源食品(禽肉、畜肉和水產(chǎn)品)中氯霉素樣本前處理凈化方法，HPLC法作為檢測手段。Polyclean X-HLB (60mg/3mL)柱凈化效果良好，回收率滿足測試要求，重現(xiàn)性好，與知名廠商同型號柱性能相當。

二、實驗目標物
氯霉素(CAS:56-75-7)

三、應用范圍
本方法適用于動物源性食品(禽肉、畜肉和水產(chǎn)品)中殘留藥物的檢測。

四、參考標準
《農(nóng)業(yè)部1025號公告-21-2008動物源食品中氯霉素殘留檢測氣相色譜法》

五、實驗材料
NuAnalyticalPolyCleanX-HLB固相萃取柱60mg/3mL，W品牌HLB固相萃取柱60mg/3mL。

六、實驗方法

1、樣品待測溶液制備
取5±0.05g豬肉樣品，于50mL離心管中，加入20    mL乙酸乙酯混合2min，4000   r/min離心15 min，取上清液于另一離心管中，再用20 mL乙酸乙酯重復提取殘渣1次，合并兩次提取液，并加入500   μL氨水，于45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，加入500  μL甲醇混合1min，加入10 mL4%NaCl渦旋混勻10 s，加入10 mL正己烷搖勻20次，4000r/min離心5 min，棄去上層，再用10 mL正己烷脫脂一次，最后加入500 μL氨水混勻供上柱凈化用。

2、活化
依次用2 mL甲醇和2 mL水活化。

3、上樣和洗脫

取上述備用液重力作用下過柱依次用2 mL水、1 mL甲醇/乙腈/水/氨水(15:15:65:5, v/

v)淋洗上樣柱并抽干，最后用2 mL 5%氨化甲醇溶液洗脫柱子上的待測成分。

4、重新溶解
收集洗脫液，于45℃氮氣吹干，準確加入1.0 mL甲醇/水(4:6,v/v)溶液溶解殘余物混勻，0.22 μm濾膜過濾，供HPLC測定。

5、HPLC條件
色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6 mm，5 μm)
檢測器：UV@278 nm
流動相：A:水           B:甲醇
洗脫方式：等度洗脫，A:B=60:40
柱溫：30℃    
流速：1.0mL/min           
進樣量：20μL

七、實驗結(jié)果
1、添加水平為0.5 mg/kg豬肉基質(zhì)中氯霉素(CAP)的添加回收結(jié)果

表1   添加水平為 0.5 mg/kg 豬肉基質(zhì)中氯霉素(CAP)的添加回收結(jié)果

名稱	回收率（%）			平均回收率（%）	RSD（%）
	1	2	3
氯霉素	92.6	89	87	89.5	3.2

    表 2    W 品牌同型號柱，添加水平為 0.5 mg/kg 豬肉基質(zhì)中氯霉素(CAP)的添加回收結(jié)果

名稱	回收率（%）			平均回收率（%）
	1	2
氯霉素	90.8	91.4		91.1