血清中皮質(zhì)甾類藥物檢測的快速萃取方法
（SuperClean SLE）
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br /> 應(yīng)用SuperClean SLE液-液萃取柱快速提取人體血清中皮質(zhì)甾類藥物。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物
曲安西龍（CAS:124-94-7）、氫化可的松（CAS:50-23-7）
三、實(shí)驗(yàn)材料
NuAnalytical SuperClean SLE液-液萃取柱1 mL。
四、實(shí)驗(yàn)方法
1、 樣品預(yù)處理
將血清樣品純水稀釋并混勻，使樣品最終的pH接近8.0。取一部分空白稀釋血清備用；剩下的空白稀釋血清加入一定體積的氫化可的松和曲安西龍儲備液，配制成濃度為1.5 mg/L的氫化可的松和曲安西龍加標(biāo)血清。
2、上樣
向SLE柱中加入1 mL預(yù)處理的樣品，加負(fù)壓啟動(dòng)流速(5-15秒)，然后讓樣品吸附于填料中約5分鐘。
3、 洗脫
向柱中加入4 mL乙酸乙酯，使溶劑通過重力流出并收集洗脫液，然后再向柱中加入4mL的乙酸乙酯。在收集結(jié)束后加適當(dāng)?shù)恼蜇?fù)壓(-15" Hg)2分鐘并收集最終洗脫出的溶劑。
4、濃縮
將上述收集的洗脫液于35℃左右的溫度低真空下濃縮，再用緩氮?dú)饬黛畛颐讶芤海?使其濃縮至近干。取1 mL(60:40, v/v)的水/甲醇定容，過0.22 μm濾膜，供HPLC測定。
5、HPLC條件
色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)
檢測器：UV@245 nm
流動(dòng)相：A: 乙腈 B:0.1%甲酸水溶液
柱溫：室溫
流速：1.0 mL/min
進(jìn)樣量：20μL
洗脫方式：梯度洗脫，
梯度程序如下：
|
保留時(shí)間/min |
A/% |
B/% |
|
0.0 |
20 |
80 |
|
15.0 |
40 |
60 |
|
15.1 |
90 |
10 |
|
19.0 |
90 |
10 |
|
19.1 |
20 |
80 |
|
21.1 |
20 |
80 |
五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1、1.5 mg/L的氫化可的松和曲安西龍加標(biāo)回收結(jié)果
表1 1.5 mg/L的氫化可的松和曲安西龍加標(biāo)回收結(jié)果
|
名稱 |
保留時(shí)間/min |
平均回收率/% |
|
曲安西龍 |
11.07 |
75.31 |
|
氫化可的松 |
15.18 |
94.47 |
